成人正畸患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的变化 Rhj好牙网

【摘要】目的研究成人正畸患者佩戴固定矫治器后牙周临床指标和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的早期变化。方法选择11例成人正畸患者。在佩戴矫治器前以及佩戴后1个月和3个月检查牙周临床指标(包括菌斑指数、龈沟出血指数、探诊深度和附着丧失)，同时收集龈下菌斑样本。用荧光实时定量聚合酶链反应检测样品中牙龈卟啉单胞菌和细菌总数，计算牙龈卟啉单胞菌的检出率和组成比。分析不同观察时间点牙周临床指标、牙龈卟啉单胞菌检出率和构成比的变化。结果佩戴后菌斑指数和龈沟出血指数明显高于佩戴前(P0.05)。戴上矫治器一个月后，探测深度增加(P0.05)，三个月后降至基线水平。没有探测深度大于2 mm的患者，也没有附着丧失的患者。三次试验中，牙龈卟啉单胞菌的检出率为45.5%，但牙龈卟啉单胞菌的组成比例无显著性差异(P0.05)。结论早期佩戴固定矫治器可导致成人正畸患者口腔局部菌斑积聚，菌群中的牙龈卟啉单胞菌增殖，导致轻度牙龈炎。 Rhj好牙网

[关键词]固定修正；牙龈卟啉单胞菌；实时定量聚合酶链反应；牙周临床指标 Rhj好牙网

固定正畸治疗可促进牙菌斑的积累，并加重正畸治疗儿童的牙龈炎症。这一观点在许多研究中得到了证实。在临床治疗中，成人正畸患者可能存在较为复杂的牙周问题，因此有必要深入研究成人正畸患者的牙周微生物状况，为临床预防固定正畸治疗过程中的牙周病提供理论依据。牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)是一种有充分证据的牙周致病菌，与慢性牙周炎关系最为密切[1]。本实验以接受固定正畸治疗的成年患者为研究对象，通过荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)研究龈下牙龈卟啉单胞菌的变化，并检测牙周临床指标，以揭示固定矫治器带来的龈下微生态环境的变化。 Rhj好牙网

1材料和方法 Rhj好牙网

1.1病例选择：选择2007-07/08大连医科大学第一附属医院正畸科新诊断的11例患者作为研究对象。11例患者中，男性2例，女性9例。平均年龄为22.5岁，从18岁到25岁不等。所有患者都要求：1)无龋齿或充填性龋齿，无牙周病和口腔粘膜病；2)口腔卫生良好，无明显不良口腔习惯；3)实验前一个月未服用抗菌药物或激素；4)患者同意参加试验，并能按时返回诊所。如果你不能按时返回诊所或在测试期间服用抗生素，你将被中途拒绝。所有患者均采用直丝弓治疗。 第一颗臼齿有一个带环，边缘位置为0.5~1.0毫米；牙龈之上；其他牙科粘结直丝托槽、托槽和带由不锈钢制成(杭州新亚公司)。正畸治疗前一周，患者接受系统的口腔卫生教育，教他们使用正畸牙刷。要求病人每顿饭后用巴斯法刷牙。 Rhj好牙网

1.2牙周临床指标的检测在初次诊断时为每个患者建立牙周病史，并在佩戴固定矫治器之前和之后1、3个月检查牙周临床指标。选择下颌中切牙作为观察位置，不需要在牙颈部进行充填。牙周检查由同一名临床医生进行。用牙周探针检测两个下颌中切牙的菌斑指数(PLI)、龈沟出血指数(SBI)、探诊深度(PD)和附着丧失。计算2颗牙齿中6个位点的平均数作为该指数的检测结果。PLI采用Silness和l？e [2]提出的方法用于检测；SBI，PD和附件丢失是根据 Rhj好牙网

1.3.1龈下菌斑的收集在佩戴固定矫治器之前以及之后1个月和3个月收集龈下菌斑，并检测牙周微生物状态。菌斑收集方法：通过润湿唾液去除龈上菌斑，用无菌美惠刮匙从两个下颌中切牙的唇侧收集龈下菌斑。将收集的牙菌斑放入装有1毫升无菌生理盐水的无菌离心管中，作为患者的微生物样品。样品储存在-70。 Rhj好牙网

1.3.2细菌DNA的提取取出保存的样品，在室温下溶解，用常规的苯酚-氯仿提取法提取细菌DNA，并保存在-20备用。 Rhj好牙网

1.3.3以牙龈卟啉单胞菌ATCC33277为标准菌株(由四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供)，以一般细菌的16S保守序列为内参照，用Taq man探针荧光实时定量聚合酶链反应检测样品的DNA，从而获得每个样品中牙龈卟啉单胞菌的数量和总菌数，从而获得不同样品中牙龈卟啉单胞菌及其总菌的检出率。 Rhj好牙网

牙龈卟啉单胞菌的检测方法如下。1)引物设计：本实验中使用的引物由日本Takara公司设计。引物和探针分别设计在大肠杆菌标准菌株ATCC 33277的16S保守序列和16S保守序列上，其序列如表1所示。2)绘制标准曲线：以10倍梯度稀释普通细菌和牙龈卟啉单胞菌标准样品的DNA为模板，进行定量PCR，制作标准曲线(图1、2)。图1一般细菌标准的标准曲线。图2牙龈卟啉单胞菌标准曲线。3)聚合酶链反应条件：95，10s；95，5 s，45次循环；在60下延伸30秒